Tecido ósseo: métodos para preservar e descalcificar

Abstract

O tecido ósseo possui uma matriz mineralizada composta de fosfato de cálcio, na forma de hidroxiapatita, e outras moléculas que tornam o tecido ósseo dificil de ser seccionado no micrótomo. A descalcificação é um processo necessário para o estudo histológico de tecidos de grande dureza e consiste em retirar a parte mineral da matriz, sem alterações na estrutura celular. Várias substâncias podem ser empregadas como descalcificadores, mas nem sempre ocorre uma boa preservação morfológica do tecido. O objetivo do presente estudo foi comparar diferentes métodos de fixação e de descalcificação, com a finalidade de preservar a parte estrutural do tecido ósseo e também a integridade dos constituintes da matriz orgânica. Foram utilizados ratos Wistar machos de aproximadamente 200 a 300g com 3 meses de idade. Após sacrifício em uma câmara de CO2, foram feitas incisões de 3 cm de diâmetro na região posterior de ambas as patas dos ratos e seus fêmures foram removidos, as patas foram dissecadas e fixadas em solução de formaldeido à 4% em tampão fosfato de sódio 0,1, pH 7,2, formol a 10% e líquido de Bouin. Após a fixação, os fragmentos foram descalcificados utilizando três protocolos de descalcificação, o EDTA (Ethylenediamine Tetraacetic Acid) 10% - pH 7.2, o método de EDTA 7% em tampão fosfato mais paraformaldeído a 4% e o método de ácido fórmico 25% - pH 2.0. Nos métodos utilizados EDTA todo o processo de descalcificação foi realizado em aparelho de microondas (Pelco, modelo 3440). No processo por ácido fórmico 25%, os fragmentos foram descalcificados por imersão até tornar o fêmur adequado para o processo de microtomia. Os resultados mostraram que há uma melhor fixação quando utilizado o formaldeído a 4% preparado a partir do paraformaldeído em tampão fosfato de sódio 0,1M, pH 7,2 e uma melhor preservação morfológica do tecido ósseo quando realizados o protocolo de descalcificação com o ácido fórmico 25%.